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DNA測序服務
1.DNA測序
        在分子生物學研究中,DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等(1977)發明的雙脫氧鏈末端終止法。
Sanger法測序的原理:
        利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物,直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成,每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止,終止點由反應中相應的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對濃度可以調整,使反應得到一組長幾百至幾千堿基的鏈終止產物。它們具有共同的起始點,但終止在不同的的核苷酸上,可通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段,凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標記進行檢測。
服務內容及周期
服務項目
實驗周期
質粒測序
24小時
PCR已純化測序
24小時
PCR未純化測序
24小時
菌液測序
24~48小時
免費服務
        測序引物設計和評估
        序列拼接
        DNA序列分析
客戶需知
        樣品要求:①質粒:100ng/ul,按照10ul/反應提供;最終洗脫時請用超純水洗脫;
                            ②PCR產物:注明PCR產物長度;3 μl電泳檢測為明亮單一條帶;PAGE純化的自帶測序引物最小
                                            體積10 μl 3.2 pmol/μl , 10個以上測序樣品,引物按1.5ul/反應提供;
                            ③菌液:最小體積200 μl(3 ml新鮮菌液可以直接提質粒做測序);若菌體已加甘油請注明;
                                   除Amp、Kan之外的抗生素需要自行提供,請隨同樣品一起備齊送達并注明工作濃度。
        引物要求:①引物長度在18~25bp之間;
                            ②四種堿基自由分布;
                            ③GC含量在50%~55%之間;
                            ④不含兼并堿基或特殊修飾的堿基;④無附加酶切位點序列的堿基完全一致。
        我們免費提供常見通用引物進行測序反應,通用引物名稱及序列詳見本公司網站公布信息。
        樣品保存時間:客戶的樣品及測序引物若無特殊要求我們將保存一個月。如果您對測序結果有任何疑問,請及時聯系我們。
提交結果
        測序彩色波形圖
        原始測序數據
測序收費細則
        DNA測序是一個鑒定基因序列的檢測方法,能否測序成功主要與樣品質量及其結構有關,實驗過程以及一些人為因素會對測序結果有些影響。
測序是否成功有一定的概率,影響實驗成功的因素很多,有些不成功的實驗我們能知道原因,也有些我們現在很難知道確切原因。不知道原因的結果,有樣品的因素,有實驗的因素,也有人為的因素。如果全部由客戶或者我們來承擔,可能對雙方都不公平。為了公平合理,減少爭議,盡快解決問題。我們結合各種可能出現的問題,事先制訂一個收費規則:
現象描述
可能原因
是否收費
菌培養不好或失敗
挑克隆有誤,菌污染,訂單提供信息有誤
質粒抽提不成功
質粒太大或活化方式不好、轉化不好、拷貝數低、培養方式不當
測序無信號、信號弱
引物與模板結合不好(引物或模板原因)
鑒定質粒或PCR濃度
建議PCR(20ul) 、質粒(30ul)去離子水溶解
設計引物和序列拼接(大片段測序)
 
可抽提出質粒但測序不成功
引物與模板結合不好(引物或模板原因)
雜 峰
引物不純,模板不純
信號中斷或衰減
高級結構 GC rich 重復序列
雙峰
非單克隆、雜合子、引物特異性差、重復序列、 Poly(A/T/G/C)結構、PCR非特異性擴增
空載體
插入失敗,培養過程中片段丟失
客戶提供引物導致結果不理想
引物不純,引物不合適測序
PCR原液純化后但測序不成功
引物與模板結合不好(引物或模板原因)
收純化費,不收測序費
 
2.PCR產物擴增及純化服務
        基于PCR擴增產物后進行測序(本公司主要用3730XL測序儀,Sanger法)。
服務內容
        PCR引物設計
        引物合成
        PCR擴增
        PCR產物純化
客戶需知
        所送實驗材料樣本必須保證新鮮,請您采樣后立即放入液氮中速凍或加入樣品穩定劑。
        由于材料的個體差異及PCR過程中會產生突變等原因,我們不保證獲取的基因與參考序列的堿基完全一致。
價格及試驗周期
服務項目
收費標準
實驗周期
PCR引物設計
免費
1個工作日
引物合成
詢價
2~3個工作日
PCR擴增
5元/反應
咨詢
PCR產物純化
5元/反應
咨詢
提交結果
        測序彩色波形圖
        原始測序數據
3.數據分析服務
        除了我們會分析您測序不理想的原因并提高測序質量外,我們還會用本公司自行研發的軟件對您的數據進行序列拼接、序列比對、突變分析等。對于大批量、高通量的數據,我們還會根據您特殊的需求編寫相應軟件,對所得數據進行處理。
   
Comate common primers.xls  
 
   
庫美生物引物合成訂單
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